项目名称

委托单位

课题老师

项目负责人

立项时间

结题时间

项目基本要求

1、成功制备重组蛋白，纯度＞90%。

2、筛选获取单克隆抗体，2-5株。

步骤

内容

周期

项目流程

第1步

1. 委托生工生物合成基因
2. 引物设计与合成
3. 质粒扩增和菌种冻存

约2周

第2步

1. 基因扩增
2. 全长蛋白表达载体构建
3. 片段蛋白表达载体构建
4. 菌株鉴定和保存

1-2周

第3步

1. 初步评估不同载体的表达情况
2. 优选符合要求的载体做小试验证
3. 根据实验结果进行条件优化

1周

第4步

1. 根据表达量放大表达纯化
2. 考核蛋白稳定性

1周

第5步

1. BALB/c小鼠免疫4-5针（每种蛋白免疫3只）
2. 免疫前后尾血效价检测
3. 优化筛选系统

2个月

第6步

1. 细胞融合，HAT选择培养
2. 间接ELISA法筛选单克隆，有限稀释法
3. 单抗细胞株扩大稳定培养

1-2个月

第7步

1. 阳性单克隆细胞注入小鼠，制备腹水
2. ProtienA/G纯化单克隆抗体
3. 抗体检测性能验证

1个月